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标题: 单抗精细纯化工艺策略 [打印本页]

作者: 汇研生物    时间: 2019-7-29 14:10
标题: 单抗精细纯化工艺策略
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引言
现代单抗药物的产业的发展,伴随着细胞培养表达量的提高,带来后期纯化的压力不断增加,如何在下游工艺开发的早期能关注的到整个生产工艺的需求,面对中试放大后更加复杂的料液,如何开发出更稳定的精细纯化工艺,在满足高分辨率同时维持高的动态载量。如何用DOE等工具来优化这些步骤,寻找工艺空间,快速拿到最优的工艺参数。在第一步用rProtein A捕获后,收集的单抗组份中脱落的rProtein A,残留HCP,内毒素,核酸,及低聚体的去除是精纯工艺最主要的工作,那么如何高效的进行单抗的精纯呢?

单抗纯化的工艺
单抗纯化通常都先微滤澄清细胞培养液之后经rProtein A Focurose 4FF捕获,快速的去除大量杂质缩小体积,rProtein A洗脱收集组份在过复合型离子交换填料(MMA/MMC Focurose HF/HPR)去除HCP.残留rProtein A.核酸,内毒素,最后在过阴离子交换层析去除痕量的HCP及内毒素等。

单抗有较强的疏水性,所以疏水层析也常用于单抗的纯化。
在rProtein A捕获后,也可以凝胶过滤层析去除聚体及HCP等杂质。
复合型离子交换平台精细纯化单抗
MMA/MMC Focurose 6HF/HPR/HPL以离子交换作用为主同时兼具一定的疏水作用力,在蛋白单体和具体分离时有优良的品质,同时在低盐环境中不稳定的蛋白也适用于此填料纯化,在洗脱时改变pH通常比改变盐浓度有更高的敏感度。

用于单抗精细纯化的工艺过程:
样品:经rProtein A Focurose 4FF捕获的单抗组份
填料:MMA Focurose HPR
平衡缓冲液:20mM柠檬酸钠+20mM磷酸钠 pH 8.0
洗脱缓冲液:20mM柠檬酸钠+20mM磷酸钠 pH3.5
线性梯度30CV
采用DOE工具系统的优化pH,盐浓度,上样量,洗脱过程梯度等。
层析完后,用0.5-1M氢氧化钠清洗层析柱(接触时间30分钟)

当然单抗精细纯化还要结合最终的目的,用途,杂质情况等系统的选择合适的纯化路线。
特别提醒:最有效的方式就是多做实验,再做实验,然后系统的分析。

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