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生物咖啡茶


被内毒素虐哭了
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-----我们有去除内素素的介质么?
用您推荐的阴离子介质去内素素效果不好?
内毒素怎么去除啊?
您那里有去除内毒素的方法吗?
...........................
时常有人问我这些问题
让我不知道如何回答是好

先了解内毒素的去除好么?
生物工艺过程中内毒素的去除策略》点击查看
内毒素的去除——摒弃幻想
     内毒素是复杂的混合物,不同来源的内毒素差异较大,而且同一样品中不同的内毒素分子之间差异较大,内毒素的去除是一个系统工程,涉及到很多方面,所以我们先要摒弃幻想,其它不管不问就希望有一款层析介质过一下就可以去除内素素这个幻想不太现实,没有那种介质过一下就可以万事大吉的可能,要科学的认知内毒素及内毒素的去除。
内毒素的去除——科学认知
   我们在去除内毒素之前,要明确内毒素是什么,它来源那里,它有哪些特性,然后我们要明确我们所做的项目去除内毒素的要求,样品中内毒素的含量,我们目标物质的制备工艺,然后结合这些去合理的设计去除内毒素的工艺。1)内毒素的去除是一个工艺过程,既然是工艺过程,就涉及到工艺的各个方面,而层析介质只是工艺中的一部分,层析介质有去除内毒素的作用,但是并能决定能否去除内素素。2)基于第一点,很多介质都具备去除内素的作用,如离子交换及疏水层析介质,但是必须结合合理的工艺过程,才能达到去除内素素的目的。
内毒素的去除——我们必须知道
1)内毒素的去除通过一个工艺过程去完成,是一个系统的工程,抛开工艺过程谈内毒素的去除意义不大。2)内素的去除要在我们开始设计工艺过程时就要设计进去,工艺过程不考虑内毒素的去除,外加一步去除内毒素的工艺,往往很难达到预期的结果。3)任何层析介质和工艺过程配合好,都有去除内毒素的作用。
   内毒素是复杂的混合物,在整个工艺中从源头就要将内毒素去除设计进去。每一步工艺过程去除一点,更要在无菌操作环境,无热源器皿中操作。     
      1.内毒素的去除是系统工程,每一步都要考虑。
      2.保证工艺过程的环境器皿的洁净无热源,避免交叉污染。
      3.内毒素是复杂的混合物,不同来源的内毒素性质差异较大,同一来源的,不同分子之间性质差异也较大,所以内毒素去除没有通用的方法。
      4.内毒素的去除通常和各种方法配合使用,如离子交换层析加纳滤,疏水层析加凝胶过滤层析等。

      如重组大肠杆菌表达的胞内可溶性Lysozyme中内毒素的去除:
     1)在收集细胞之后,重悬用的水,器皿都要无热源,破碎后,先硫酸氨盐析,盐析的样品用疏水层析介质Phenyl Focurose 6FF(HS)进行纯化,此时内毒素在高盐环境中聚集,过疏水层析时流穿,此过程可将内毒素从100万EU/ml降低到1万EU/ml;
    2)经过疏水层析纯化的样品,内毒素含量仍然很高,在洁净环境中,在过离子交换层析Q Focurose 6XL,选择合适的层析条件,让蛋白流穿,内毒素和填料结合。此过程可将内毒素从1万EU/ml降低到100EU/ml。
   3)经过离子交换层析的样品,在用凝胶过滤层析,用Focudex G75,缓冲液中加入200mM的NaCl,避免蛋白和内毒素结合,也可以加入2%的Triton X-100.此过程可将内毒素从100EU/ml降低到0.1EU/ml.

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发表于 2018-10-26 11:23:43 | 显示全部楼层 |阅读模式

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