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生物咖啡茶

本帖最后由 汇研生物 于 2019-7-29 13:40 编辑


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  慢病毒载体简介
慢病毒载体可以将外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色体上,从而达到持久性表达目的序列的效果。在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞,从而达到良好的的基因治疗效果。对于一些较难转染的细胞,如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等,使用慢病毒载体,能大大提高目的基因或目的shRNA的转导效率,且目的基因或目的shRNA整合到宿主细胞基因组的几率大大增加,能够比较方便快捷地实现目的基因或目的shRNA的长期、稳定表达。所以,在体外实验及体内实验的研究中,慢病毒 己经成为表达外源基因或外源shRNA的常用载体形式之一,并且正在获得越来越广泛的应用。

慢病纯化
慢病毒纯化可参考上面工艺过程,也可在细胞裂解液澄清后用切向流过滤技术(通常300KDa孔径)进行浓缩或PEG-8000浓缩后进行凝胶过滤层析(Focurose 4FF)或者离子交换层析。

离子交换层析推荐缓冲液:
平衡缓冲液:20mM PB,20mM NaCl  pH 7.0
洗脱缓冲液:平衡缓冲液+1M NaCl拉梯度洗脱
HPR基质离子交换介质其高刚性,高流速,高载量,高分辨率使其在病毒类生物物质纯化上有显著优势。
HPL大孔琼脂糖基质离子交换介质在超大生物物质纯化中,其大孔径,有高载量,高生物活性回收率的特点,在慢病毒纯化中有优良品质。
填料联系方式:W/Q 514099167

慢病毒载体应用前景
获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的基因治疗  

对于AIDS的基因治 疗方案,基本上是以逆转录病毒载体介导的方式,将抗病毒基因体外导入CD4+T淋巴细胞或CD34+的造血祖细胞,再回输体内。常用的抗病毒基因包括自杀基因、反义RNA、核酶、RNA诱饵的相应DNA序列以及调节蛋白或结构蛋白的突变体基因等。由于这些治疗基因不能到达巨噬细胞和多能干细胞,因此难以重建免疫;此外,体外操作费用昂贵,不适于大规模应用。 
慢病毒载体的为AIDS的基因治疗带来了新的希望,它可能具有以下优势:
第一,利用HIV-1本身包膜蛋白Env包裹的载体颗粒可以将抗病毒基因直接运抵CD4+T淋巴细胞和巨噬细胞,适于直接的体内治疗,而包被了VSV包膜的载体颗粒又能感染多能干细胞,有利于免疫重建;
第二,患者体内的野生型HIV-1可将携带抗病毒基因的载体拯救出来,使载体扩增并扩散到周围更多的细胞中发挥抗病毒作用;
第三,如果将抗病毒基因置于HIV-1本身的长末端重复序列(LTR)控制之下转导细胞,则只有当HIV-1感染该细胞时,Tat蛋白反式激活LTR中的TAR元件,抗病毒基因才会表达,使基因表达具有了靶向性。  

神经系统疾病的基因治疗

Lesch-Nyhan综合征是一种遗传性的代谢性脑病,由编码次黄嘌呤核糖转移酶(HPRT)的基因缺陷所引起;帕金森氏病是一种退行性脑病,由于产生多巴的神经元退化,导致大脑纹状体内多巴胺水平降低,临床上给患者注射左旋多巴可改善症状,但长期注射及药物的副作用令患者难以承受。较为理想的方式是在脑内持续表达酪氨酸羟化酶(TH),使其催化酪氨酸转变为为左旋多巴;Alzheimer氏病也是一种多因素引起的退行性 脑病,造成大脑皮质和 海马回神经元萎缩,通常采用神经营养因子防止神经元退化。由于慢病毒载体能够体内转导神经元并建立长期稳定的表达,因此对于以上疾病的基因治疗非常具有吸引力。可以设想,分别将编码HPRT、TH或神经营养因子的基因通过慢病毒载体介导,体内注射至神经元,有可能对上述疾病产生良好效果。  

血液系统疾病的基因治疗

造血干细胞一直被认为是对血液系统恶性肿瘤或其它疾病(如地中海贫血、镰刀性红细胞贫血、血友病等)进行基因治疗的理想靶细胞,但由于缺乏使目的基因在造血干细胞稳定表达的,这方面的研究进展不明显。尽管小鼠逆转录病毒载体能够转导经细胞因子刺激后进入细胞周期的 造血干细胞,但经此处理的干细胞性质可能会发生改变。慢病毒载体则可通过直接转导静止的干细胞避免这类。将多药耐药(MDR)基因导入 造血干细胞,可使其耐受大剂量化疗,可能成为治疗白血病和其它恶性肿瘤的有效途径;将正常珠蛋白基因或凝血因子Ⅷ、Ⅸ分别导入造血干细胞,有望对 地中海贫血、镰刀性红细胞贫血和血友病产生疗效。
(此段内容选自搜狗百科)
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发表于 2019-7-29 13:38:27 | 显示全部楼层 |阅读模式

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