请选择 进入手机版 | 继续访问电脑版

生物咖啡茶

汇研生物—Ni-IDA/IMAC/TED
1.含有his标签蛋白的细胞(菌体)破碎释放蛋白时的破碎功率不合适(太小蛋白未能完全释放,太大蛋白碳化),此时就要优化细胞破碎的方法和条件。

2.his未表达或者his蛋白表达过程中his丢失,必要时增加蛋白序列中his的个数并确保正确表达,可通过WB的方式去验证是否有表达。

3.his标签在蛋白高级结构中暴露的不完全被包裹在蛋白结构里面,此时就要用6-8M尿素或盐酸胍使his标签暴露出来,同时要明确还有变性剂的样品最佳镍柱是IMAC/NTA 。
(联系:W/Q:514099167,T:15771973009)

4.缓冲液体系不合适,上样缓冲液及平衡缓冲液中螯合剂,还原剂及咪唑的含量影响结合,应确保不含有螯合剂,还原剂,咪唑含量控制在10mM以内。另外缓冲液的pH也不宜太低,应控制在7.3-8.5之间。

5.层析过程中流速过快,蛋白和镍柱接触时间太短。此时就要降低流速增加蛋白和镍柱的接触时间,确保足够的结合过程。

6.镍柱没有平衡好,特别是新的镍柱里面有保存液20%的乙醇,在开始使用时,要将乙醇彻底清洗干净,并用pH7.3-8.5的缓冲液充分平衡,使镍柱达到可以结合his蛋白的状态,在开始上样结合。

7.样品中his蛋白的丰度太低或者镍柱的载量太低也会导致his蛋白和镍柱不结合,若样品丰度太低,首先要对其进行浓缩,在上样,或者选择质量好载量高的镍柱,如汇研生物的Ni Focurose 6FF IMAC(联系W/Q:514099167 ,T:15771973009)

8.CHO等细胞分泌表达的his蛋白,体系中通常含有螯合剂和还原剂和常规镍柱结合效果很差,甚至不结合,此时就要先置换缓冲液体系在上样(置换体系可用汇研生物的脱盐柱 Focudex G-25),或者用汇研生物高耐受的镍柱(Ni Focurose 6FF TED),但是必须要清楚高耐受的镍柱比IMAC/IDA的镍柱的载量要低很多,结合力也要弱很多。

小明
该如何选择合适的镍柱啊?
IDA/IMAC/TED镍柱该如何选择

汇研生物—W/Q:514099167,T:15771973009
请参考《详述His标签蛋白的纯化》点击括号里面字体即可查看。

生物制药合伙人《生物制药合伙人:zpt_Partner》公众号!秉持分享传承生物制药相关技术,汇集生物制药相关的细分技术,网罗业界同仁的丰富经验心得,助力行业的发展,以疫苗,抗体,蛋白等生物制药,生物技术的核心技术分享传承为初衷,助力行业发展。欢迎您把此公众号分享给自己的同学,同事,朋友!
谢谢。您有任何问题都可以加微信514099167交流,谢谢。
发表于 2019-7-29 13:51:02 | 显示全部楼层 |阅读模式

回复 | 使用道具 举报

该帖共收到 0 条回复!
B Color Image Link Quote Code Smilies
高级模式

本版积分规则

北京好思康科技有限公司版权所?

进入手机版 | 生物咖啡?/a> ( 京ICP备17071189号-1 )
2020-03-28 22:19:40

快速回复 返回顶部 返回列表